捻转血矛线虫肌动蛋白基因的克隆与表达及其DNA疫苗的构建

• 作者: 严若峰 宋小凯 徐立新 李祥瑞 王晶晶 闫峰宾
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 捻转血矛线虫 肌动蛋白基因 原核表达 DNA疫苗
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 87-93
• 分类号: S852.72+3
• 字数: 5339字
• 语种: 中文

摘要

根据秀丽新杆线虫等其他几种线虫的肌动蛋白(Actin)开放阅读框(ORF)设计简并引物,以捻转血矛线虫总RNA为模板,合成cDNA,用RT-PCR方法扩增出约为1 100bp的DNA片段.将该片段克隆到T载体后进行序列测定和分析,结果表明该基因的ORF为1131bp,与秀丽新杆线虫、新杆状线虫、肿孔古柏线虫等的同源性高达86％以上,推导出其蛋白质序列含有376个氨基酸,与胎生网尾线虫、秀丽新杆线虫、新杆状线虫、马来丝虫等的肌动蛋白相似性均为98％以上,说明成功克隆了捻转血矛线虫actin基因.将捻转血矛线虫肌动蛋白基因的ORF克隆到pET-28a(+)中,构建了原核表达载体,用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE分析发现,该基因获得了表达,且以包涵体的形式存在,融合蛋白相对分子质量约46×103.以此重组蛋白为抗原,用自然感染捻转血矛线虫山羊血清为第一抗体进行Westernb blot分析,结果出现1条特异性条带,表明捻转m矛线虫Actin蛋白在自然感染过程中能被宿主的免疫系统识别,可能是一种天然抗原.用纯化重组Actin蛋白免疫小鼠,制备抗血清,以该血清为第一抗体进行Westem blot,结果发现该血清能识别捻转血矛线虫成虫蛋白谱中相对分子质量约为42×103的蛋白条带.将捻转血矛线虫actin基因亚克隆到真核表达载体pVAX1中,构建了DNA疫苗pVAX1-ACT,动物免疫试验结果表明该DNA疫苗在机体内获得了表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李祥瑞	南京农业大学动物医学院	126	1418	20.0	33.0
2	徐立新	南京农业大学动物医学院	57	304	11.0	14.0
3	严若峰	南京农业大学动物医学院	53	256	10.0	13.0
4	王晶晶	南京农业大学动物医学院	10	66	5.0	8.0
5	宋小凯	南京农业大学动物医学院	32	84	6.0	8.0
6	闫峰宾	南京农业大学动物医学院	1	1	1.0	1.0