捻转血矛线虫精氨酸激酶基因的克隆与表达及酶活性分析

• 作者: 严若峰 宋小凯 张振超 徐立新 李祥瑞 马春晓
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 捻转血矛线虫 精氨酸激酶 基因克隆 酶活性
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 100-106
• 分类号: S895.3+1
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/j.issn.1000-2030.2014.03.015

摘要

根据捻转血矛线虫精氨酸激酶(arginine kinase,AK)基因序列设计1对特异性引物进行RT-PCR,将得到的片段克隆到pMD19-T载体后进行序列测定和分析;将该基因的开放阅读框克隆到pET-32a(+)载体中,获得原核表达质粒pET32/AK并转化大肠杆菌BL21;重组子用IPTG诱导后用SDS-PAGE分析其表达情况;对重组蛋白变性、纯化后用梯度尿素对其进行连续透析复性,对复性后的重组蛋白用定磷法进行精氨酸激酶活性分析.结果表明从捻转血矛线虫总RNA中扩增出大小约为1 104bp的DNA片段.该基因与GenBank中捻转血矛线虫AK基因的相似性为89％.SDS-PAGE电泳结果表明该基因获得了表达,重组融合蛋白相对分子质量大小约为60.3× 103,主要以包涵体形式存在.Western blot分析显示该重组蛋白可被人工感染捻转血矛线虫山羊的血清所识别.重组蛋白具有一定的酶活性,其最佳反应温度和pH值分别为30℃和7.5.结论:该重组蛋白表达成功并具有一定的抗原性和激酶活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李祥瑞	南京农业大学动物医学院	126	1418	20.0	33.0
2	徐立新	南京农业大学动物医学院	57	304	11.0	14.0
3	严若峰	南京农业大学动物医学院	53	256	10.0	13.0
4	张振超	南京农业大学动物医学院	7	150	4.0	7.0
5	宋小凯	南京农业大学动物医学院	32	84	6.0	8.0
6	马春晓	南京农业大学动物医学院	1	5	1.0	1.0