常见曲霉菌的实时定量PCR诊断技术的研究

• 作者: 武学成 龚文胜
• 来源期刊: 现代检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 曲霉菌 实时定量PCR 内转录间隔区2
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 30-34
• 分类号: R379|Q503
• 字数: 3760字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7414.2012.03.009

摘要

目的 建立常见曲霉菌的实时定量PCR诊断技术.方法 针对黄曲霉菌、烟曲霉菌、构巢曲霉菌、黑曲霉菌和土曲霉菌内转录间隔区2(internal transcribed spacer 2,ITS2)保守基因设计引物和探针,通过普通PCR扩增其ITS2基因片段,作为实时定量PCR反应模板,通过实时定量扩增和分析其解链曲线来鉴定常见曲霉菌,同时分析该方法灵敏度.结果 真菌通用引物扩增五种常见曲霉菌ITS2基因DNA片段,大小为350 bp左右.实时定量PCR分析和探针解链曲线分析结果显示土曲霉解链温度(melting temperature,Tm)值为57℃±0.12℃,黄曲霉Tm值为59℃±0.13℃,烟曲霉Tm值为63℃±0.17℃,土曲霉Tm值为66℃±0.15℃,构巢曲霉Tm值为66℃±0.14℃,黑曲霉Tm值为68℃±0.12℃.方法 灵敏度分析显示各曲霉菌最低模板DNA反应浓度分别为烟曲霉51.2· fg/μl,黄曲霉621.3 fg/μl,黑曲霉19.5 fg/μl,土曲霉82.4 fg/μl和构巢曲霉520.8fg/μl.结论 创建一种可快速鉴定五种常见曲霉菌的实时定量PCR诊断技术,该方法特异度好、灵敏度高,符合临床需要,能为侵袭性真菌感染(invasive aspergillosis,IA)提供新的选择.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	龚文胜		14	81	5.0	8.0
2	武学成		3	4	2.0	2.0