乌珠穆沁羊成肌细胞的诱导分化及相关基因表达

• 作者: 李发弟 杜立新 王皓 魏彩虹
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 成肌细胞 原代培养 分化 肌肉发育 绵羊
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 283-288
• 分类号: S826
• 字数: 4512字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2012.03.008

摘要

成肌细胞(myoblast cell)是指胞浆中含有肌丝的肌组织前体细胞,具有自我更新和促进肌纤维再生的能力,是体外研究肌肉发育调控机理的理想载体.本研究采取成年乌珠穆沁羊(Ovis aries)的背最长肌组织,结合使用胶原酶消化和差速贴壁两种方法分离纯化羊成肌细胞,并应用CCK-8法检测细胞生长曲线,苏木素-伊红染色与定量PCR检测成肌分化效果.结果显示,分离的细胞接种到培养瓶中24h后,高折光性亮圆形细胞开始贴壁,少量细胞有小突起.培养48 h后,出现大量长梭形细胞,部分细胞伸出突起呈星型,细胞胞浆丰富.细胞生长曲线显示,成肌细胞符合正常生长规律,细胞传至第三代后用于CCK-8试剂盒检测,经分析后发现细胞符合正常生长规律,生长曲线近似S形,3d后开始进入对数生长期,第3～8天增殖迅速,第8天后细胞增殖速度减缓,第9天基本进入平台期.成肌诱导5d后,大量成肌细胞开始从单个核期进入合体细胞阶段,融合成核位于中央的多核性长竹状初生肌管.随后逐渐规律性地沿一个方向平行排列,形成多核的肌管.定量PCR结果显示,MSTN(myostatin)、FST (follistatin)、BTG2 (B-cell translocation gene 2)与BTG3 (B-cell translocation gene 3)在成肌细胞分化过程中有不同程度表达,存在阶段特异性.MSTN与FST随分化时间推移表达量逐渐降低,但FST基因表达量显著高于MSTN基因(P＜0.05)；分化期成肌细胞的BTG3表达极显著高于未分化期(P＜0.01),而BTG2的表达则显著低于细胞未分化状态(P＜0.05).研究结果提示,本研究分离的羊成肌细胞具有肌源性,可分化为肌管；BTG2与BTG3两基因呈相反趋势表达,可能说明基因在肌肉发育过程中起不同作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李发弟	甘肃农业大学动物科技学院	178	1869	22.0	32.0
2	杜立新	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	110	1652	21.0	37.0
3	魏彩虹	甘肃农业大学动物科技学院	23	92	7.0	9.0
5	王皓	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	23	37	3.0	6.0