牛和小鼠胎儿成纤维细胞混合制成的饲养层对牛胚胎干细胞的体外培养

• 作者: 丛姗 刘东军 李硕 梁浩 温建勋 王瑞 郝斐
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 牛 胚胎干细胞 成纤维细胞 混合饲养层
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 畜牧·资源昆虫
• 页码范围: 2474-2481
• 分类号: Q813|S823
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.12.017

摘要

[目的]建立适合的牛胚胎干细胞培养环境,保持其未分化状态,保证细胞的全能性.[方法]分别培养小鼠胎儿成纤维细胞( mouse embryonic fibroblast,MEF)和牛胎儿成纤维细胞(bovine embryonic fibroblast,BEF),用丝裂霉素C处理两种成纤维细胞分别计数后按1∶0、1∶1、2∶1、1∶2和0∶1的比例制成混合饲养层,观察牛胚胎干细胞的生长状态,并对生长在混合饲养层上的牛胚胎干细胞进行碱性磷酸酶,OCT4和SSEA-1免疫组化检测,OCT4、SOX2、NANOG mRNA表达RT-PCR检测、体外分化形成拟胚体等试验.[结果]①生长在混合饲养层上的牛胚胎干细胞比单独生长在小鼠或牛胎儿成纤维细胞饲养层的结构致密、与滋养层界限明显;②小鼠胎儿成纤维细胞和牛胎儿成纤维细胞在1∶1比例混合下牛胚胎干细胞克隆结构致密、显著堆积且边缘轮廓清晰优于其它比例组合；③获得的牛胚胎干细胞AKP染色及OCT4、SSEA-1抗原表达均成阳性,分别在体外分化培养形成了拟胚体.[结论]小鼠和牛胎儿成纤维细胞在以1∶1的比例混合下制成的饲养层可更好地支持牛胚胎干细胞的体外培养,获得的克隆形态最好.