抗噻菌灵单克隆抗体的制备及异源IC-ELISA检测方法的建立

• 作者: 刘凤权 华修德 李刚 王玉燕 钱国良
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 噻菌灵 单克隆抗体 IC-ELISA HPLC
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 38-44
• 分类号: S482.2
• 字数: 5053字
• 语种: 中文

摘要

为建立噻菌灵酶免疫检测方法,制备3种噻菌灵的半抗原(H1、H2和H3).利用活泼酯法制备免疫抗原H1-BSA、H3-BSA和包被抗原H1 -OVA、H2-OVA、H3-OVA.采用杂交瘤细胞融合方法获得4株稳定分泌抗噻菌灵单克隆抗体的细胞株,分别命名为1-4G9、1-6D3、3-1F9和3-5D4.采用间接竞争酶联免疫法(IC-ELISA),将上述4株抗体分别与3种包被抗原进行组合,从中选择出一个最优组合:H3-OVA/1-6D3.据此建立的异源IC-ELISA检测方法对噻菌灵的IC50为10.9 μg·L-1,检测限( IC10)为2.2 μg·L-1,与3种噻菌灵类似物的交叉反应率均小于0.1％；在自来水、苹果、梨的添加回收试验中,IC-ELISA法测定的回收率依次为95.9％ ～ 118.1％、90.0％～ 117.6％、74.9％～ 95.6％；HPLC法测定的回收率依次为92.7％ ～97.6％、98.9％～ 100.9％、91.6％～105.4％,IC -ELISA法与HPLC法测定结果基本一致.上述结果表明:抗噻菌灵单克隆抗体酶免疫检测具有很强的特异性和准确性.