PCR-DGGE技术分析浸矿体系细菌群落结构的实验优化

• 作者: 丁丽娜 季秀玲 张兰兰 林连兵 魏云林
• 来源期刊: 昆明理工大学学报（自然科学版）
• 学科: 工学
• 关键词: 浸矿体系 16SrRNA基因 PCR-DGGE实验优化
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 页码范围: 14-18
• 分类号: TF18
• 字数: 3077字
• 语种: 中文

摘要

为了研究低品位黄铜矿细菌搅拌浸出的浸矿菌液中的细菌群落结构,对 PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳)技术相关的实验方法进行了优化,主要涉及低丰度基因组 DNA提取方法优化、16SrRNA基因的 PCR扩增条件优化以及变性梯度凝胶电泳条件的优化.结果表明,采用分级离心多次浓缩的方法收集矿浆样品中的菌体,再用试剂盒提取基因组 DNA,有较好效果;使用含特定“GC夹板”的引物5′-CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGTCCCGCCGCCCCCGCCCG-3′进行热启动降落 PCR,能显著提高目的条带的 PCR扩增效率;当 DGGE电泳设置温度为60℃左右,胶浓度为6%,尿素变性梯度为30%~50%,恒定电压为100V,时间为9h时,可以获得效果较好的 DGGE电泳图谱,该优化方案提高了对浸矿体系中细菌群落结构的检测效果

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林连兵	昆明理工大学生命科学与技术学院	123	446	10.0	15.0
2	季秀玲	昆明理工大学生命科学与技术学院	122	436	11.0	15.0
3	魏云林	昆明理工大学生命科学与技术学院	148	616	13.0	18.0
4	张兰兰	昆明理工大学生命科学与技术学院	7	32	4.0	5.0
5	丁丽娜	昆明理工大学生命科学与技术学院	2	2	1.0	1.0