玉米病程相关蛋白1基因的克隆与表达分析

• 作者: 刘丽 张志明 潘光堂 王静 赵茂俊
• 来源期刊: 浙江大学学报（农业与生命科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 玉米穗粒腐病 病程相关蛋白 原核表达 表达分析
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 生物科学与技术
• 页码范围: 35-42
• 分类号: Q78
• 字数: 5354字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9209.2012.01.005

摘要

采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从耐玉米穗粒腐病自交系R15中分离得到病程相关蛋白1 (pathogenesis-related protein 1,PR1)基因的开放阅读框,命名为ZmPR1,测序结果显示该序列长为528 bp,编码175个氨基酸,其蛋白质分子质量为18.7 ku.利用NCBI/Blastp和Genedoc软件进行同源性比对显示,ZmPR1基因编码蛋白与水稻、小麦、拟南芥等高等植物中的PR1蛋白相似性较高,且具有相同的富含半胱氨酸蛋白(cysteine-rich secretory protein,CAP)的保守结构域.将构建的重组载体pET32a(+ )-ZmPR1在宿主菌Escherichia coli BL21中经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,在不同的诱导时间、诱导温度和IPTG诱导浓度下对诱导条件进行优化.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果表明,ZmPR1基因的最佳诱导条件为IPTG终浓度0.6mmol.L-1,诱导温度28℃,且诱导时间对表达量影响不大.免疫印迹(Western blot)检测证实有39 ku的融合蛋白表达,表明ZmPR1基因在大肠杆菌中已成功表达,这为蛋白纯化及单克隆抗体的制备提供了一定的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵茂俊	四川农业大学生命科学与理学院	35	520	14.0	21.0