利用piggyBac载体制备小鼠诱导性多能干细胞

• 作者: 刘鹏涛 吴宝江 孙伟 张金吨 张静南 戴雁峰 李云霞 李喜和 李瑶 汪玮 胡树香 苏杰 赵丽霞 郭继彤
• 来源期刊: 中国科学（生命科学）
• 关键词: 小鼠 piggyBac 诱导性多能干细胞 嵌合胚胎 拟胚体
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 553-561
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.1360/052011-779

摘要

小鼠体细胞可通过转入干细胞转录因子而诱导生成多能干细胞,这种干细胞称为诱导性多能干细胞(iPSC).利用逆转录病毒、慢病毒、腺病毒、质粒载体、多蛋白表达系统、合成性mRNA及microRNA已成功将小鼠和人的体细胞诱导成多能干细胞.piggyBac是转座频率较高的转座子载体,也已作为载体成功诱导出多能干细胞.为了研究以piggyBac载体诱导出的多能干细胞的体内外分化能力,利用携带Oct4,Sox2,Klf4和c-Myc转录因子的piggyBac转座载体进行了小鼠体细胞的转染诱导,结果诱导获得的iPS细胞碱性磷酸酶染色呈阳性；免疫组化染色OCT4,NANOG,SSEA-1为阳性；RT-PCR检测Oct4,Sox2,c-Myc和Klf4呈阳性.同时诱导获得的iPS细胞系在体外自发分化后,免疫组化染色AFP,BRACHYURY和NCAM1呈阳性,表明分化形成了3个胚层的细胞；该细胞系皮下注射免疫缺陷小鼠iPS细胞形成了畸胎瘤.实验发现,获得的干细胞系可与小鼠8-细胞聚合,进入到嵌合胚胎的内细胞团.这些结果表明,由piggyBac载体诱导的小鼠多能干细胞iPS具有干细胞的主要特性,包括体内外的分化能力.