利用 piggyBac 转座子构建小鼠诱导性多能干细胞及其鉴定

• 作者: 任丽伟 李富荣 杨晓菲 杨璐 邓春艳 魏培 齐晖
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: piggyBac 重编程 小鼠胚胎纤维细胞 诱导性多能干细胞
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 676-680
• 页数: 5页
• 分类号: Q813
• 字数: 4106字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20160408

摘要

目的：利用 piggyBac 转座子载体携带鼠源 Oct4、Sox2、Klf4和 c-Myc 4个核转录因子，重编程胎鼠成纤维细胞（MEFs）为诱导性多能干细胞（iPSCs），并探讨其作用效果。方法：分离 Oct4-GFP 小鼠的MEFs，将携带鼠源 Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc 等4个基因的 piggyBac 转座子转入至 MEFs；观察 iPSCs 克隆形成过程的形态表现；分析 iPSCs 染色体组成，评价 iPSCs 的核型变化。RT-PCR 法检测小鼠 iPSCs 中胚胎干细胞（ESCs）相关基因 Oct4、Nanog 和 FGF4的表达；免疫荧光、碱性磷酸酶染色和流式细胞术检测小鼠 iPSCs 中SSEA-1和 Nanog 蛋白表达。将 iPSCs 接种到 NOD-SCID 小鼠腹股沟进行畸胎瘤实验，4周后取畸胎瘤制备组织切片进行 HE 染色，观察组织分化情况。结果：通过 piggyBac 转座子成功构建 iPSCs，其具有正常的核型，形态与小鼠 ESCs 相似，克隆边界清晰、呈圆形或卵圆形，克隆内细胞致密、核大。RT-PCR 和免疫荧光染色分析， iPSCs 可表达多能性基因和蛋白（Oct4、Sox2、Kif4和 c-Myc）。在免疫缺陷小鼠体内接种 iPSCs 可形成具有3个胚层组织的畸胎瘤。结论：以 piggyBac 转座子为载体将 Oct4、Sox2、Klf4和 c-Myc 4个转录因子基因导入MEFs，可以成功诱导 MEFs 成为具有 ESCs 特征的正常核型 iPSCs。