Arkadia和UCH37表达载体的构建及其对TGF-β1/Smads信号通路的影响

• 作者: 吴国娟 廖芳芳 张中文 苑嗣纯
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: Arkadia基因 UCH37基因 转染 表达载体 TGF-β1/Smads信号通路
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 1848-1856
• 分类号: S814.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.09.021

摘要

[目的]构建泛素启动酶Arkadia和泛素羧基末端水解酶-5(亦称UCH37)的表达载体,并探讨Smad7蛋白的泛素化修饰对马兜铃酸肾病中TGF-β1/Smads信号通路的影响.[方法]通过观察绿色荧光的表达量及real-time PCR反应优化转染条件,转染Arkadia和UCH37 siRNA,real-time PCR检测mRNA表达抑制率.分别构建Arkadia和UCH37的表达载体pGPU6/GFP/Neo,经鉴定后转染细胞,real-time PCR和Western blotting检测Arkadia、UCH37和Smad7的表达变化.[结果]①30 pmol siRNA和1.5μL LipofectamineTM 2000为最佳转染条件；②Arkadia-1490和UCH37-721的干扰效果最明显；③载体的插入序列完全正确,且pGPU6/GFP/Neo-Arkadia能上调马兜铃酸肾病模型中Smad7的表达,而pGPU6/GFP/Neo-UCH37使Smad7表达下降.[结论]成功构建了表达载体pGPU6/GFP/Neo-Arkadia和pGPU6/GFP/Neo-UCH37,且Arkadia和UCH37可分别放大、抑制TGF-β1/Smads信号通路.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴国娟	北京农学院动物科技学院	115	1400	22.0	33.0
2	张中文	北京农学院动物科技学院	59	581	12.0	23.0
3	苑嗣纯	北京农学院动物科技学院	12	38	3.0	5.0
4	廖芳芳	北京农学院动物科技学院	5	4	1.0	1.0