丙型肝炎病毒E1蛋白活化MAPK/ERK信号通路促进肝癌细胞增殖

• 作者: 刘娇 单晓亮 周帆 唐霓 权会琴 陈庆美 陈林林
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 丙型肝炎病毒 E1蛋白 丝裂原活化蛋白激酶 细胞增殖
• 年，卷（期）: 2012,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 42-48
• 分类号: R512.6
• 字数: 4879字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2012.01.009

摘要

目的 研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)编码蛋白E1的生物学功能.方法 分别构建编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b 的腺病毒载体Ad-E1、Ad-E2、Ad-NS3、Ad-NS5a、Ad-NS5b;将重组并包装的腺病毒分别感染SMMC-7721细胞,测定感染滴度,通过RT-PCR方法在转录水平鉴定HCV E1、E2、NS3、NS5a、NS5b的表达,用Western 印迹在蛋白水平鉴定E1蛋白的表达.腺病毒感染SMMC-7721细胞后,通过细胞增殖实验筛选生物学功能最明显的蛋白.将筛选到的Ad-E1感染SMMC-7721细胞,用MTS、结晶紫、细胞周期实验观察体外过表达E1蛋白对感染细胞增殖的影响;Western印迹检测p-ERK、ERK的表达;RT-PCR检测c-Myc、cyclinD1、c-Jun、c-Fos基因的表达.结果 成功扩增了能够编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b 的高滴度腺病毒Ad-E1、Ad-E2、Ad-NS3、Ad-NS5a、Ad-NS5b,并且通过RT-PCR方法在转录水平鉴定了目的 基因的表达,Western 印迹方法在蛋白水平鉴定了E1蛋白的表达.通过细胞计数、MTS、结晶紫实验证实Ad-E1感染组细胞较对照组增殖速度加快,细胞周期显示Ad-E1感染组细胞 34.38 %处于S期,明显高于Ad-GFP(27.32 %)(P＜0.05)对照组;Ad-E1感染组p-ERK蛋白表达量增高,同时与细胞增殖相关的MAPK/ERK下游基因转录水平上调.结论 体外过表达HCV E1蛋白可以明显促进SMMC-7721细胞的增殖,其促增殖作用可能与MAPK/ERK信号通路的活化相关.