丙型肝炎病毒HCV E1区基因在真核细胞中的表达及表达产物的初步应用

• 作者: 冯百芳 蒋栋 陶其敏 马大龙 高建恩
• 来源期刊: 北京大学学报医学版
• 关键词: HCVE1 真核细胞 肝炎病毒 丙型 基因表达 转染
• 年，卷（期）: 2000,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 22-25
• 页数: 4页
• 分类号: R373.21
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1671-167X.2000.01.007

摘要

目的:建立丙型肝炎病毒包膜区基因的真核表达载体,并对表达产物进行鉴定,同时测定表达产物与抗HCV阳性血清的反应情况.方法:用限制性内切酶XbaⅠ和EcoRⅠ从原核表达载体pMS-CVE1中切下HCV E1区的基因片段,并将其克隆到真核表达载体PcDNA3.1中,阳性克隆经SmaⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定后,用磷酸钙共沉淀法将其转染入小鼠骨髓瘤细胞SP2/0中,同时利用Western Blot方法对表达产物进行鉴定; 测定表达产物与20份抗HCV阳性血清标本和10份抗HCV阴性的血清标本的反应性.结果:经酶切过夜后从原核表达载体上切下的基因片段与经过同样双酶切的真核表达载体PcDNA3.1连接,阳性克隆经SmaⅠ和XbaⅠ酶切后产生了预期大小的354bp的片段.经磷酸钙转染,产生了具有对G418抗性的细胞克隆,经Western Blot方法用抗HCV E1区合成肽抗原的单抗检测表达产物,产生了特异的反应;并证实该表达产物与HCV患者的血清有特异反应.经Western Blot证实在抗HCV阳性血清中有35%(7/20)可与表达产物产生特异的反应;阳性细胞经3个月传代后,仍可检测到HCV E1的表达产物.结论:此项研究所建立的能够表达HCV E1基因细胞系表达产物可与阳性血清发生特异性反应,该细胞系的建立为进一步研究抗HCV E1抗体的临床意义及进行有关HCV核酸免疫的研究创造了条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马大龙	北京医科大学免疫学系	20	305	7.0	17.0
2	陶其敏	北京医科大学人民医院肝病研究所	38	165	6.0	11.0
3	冯百芳	北京医科大学人民医院肝病研究所	12	21	3.0	4.0
4	高建恩	北京医科大学人民医院肝病研究所	8	8	2.0	2.0
5	蒋栋	北京医科大学人民医院肝病研究所	3	2	1.0	1.0