牛支原体的环介导等温扩增快速检测技术研究

• 作者: 付萍 侯轩 吴文学 张海燕 张跃伟
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛支原体(Mycoplasma bovis 环介导等温扩增(LAMP) PCR
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 技术改进
• 页码范围: 218-224
• 分类号: S858.23
• 字数: 4551字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2012.02.015

摘要

牛支原体(Mycoplasma bovis是感染牛的一种重要的致病性病原体.本研究利用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立了牛支原体的快速检测方法.该方法以牛支原体保守性基因uvrC为靶序列设计了5条特异引物,在58℃等温条件下,60 min即可完成反应.LAMP方法能检测出20 pg牛支原体DNA,较PCR方法高100倍,用牛鼻支原体(M.bovirhinis)、无乳支原体(M.agalactiae)、精氨酸支原体(M.ariginini)、牛副流感病毒(BPIV)、牛腺病毒(BADV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)作特异性检测,两种方法均有很高的特异性.本研究还将荧光显色剂钙黄绿素(calcein)和Mn2+用于LAMP反应结果的可视化检测.临床鼻拭子样品煮沸后,可直接进行等温扩增,省去了DNA提取步骤.在对167个临床鼻拭子样本的检测中,LAMP方法检测结果阳性率(26.95％)高于PCR方法检测出阳性率(19.16％),这证明本研究所建立的方法,与PCR法比较更适于临床样品的检测.研究结果表明,LAMP方法具有操作简便、快速、高效、敏感、特异、经济等特点,适于基层实验室监测的广泛使用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张跃伟	中国农业大学动物医学院	8	134	7.0	8.0
2	吴文学	中国农业大学动物医学院	29	418	10.0	20.0
3	付萍	中国农业大学动物医学院	5	95	5.0	5.0
4	侯轩	中国农业大学动物医学院	1	18	1.0	1.0
5	张海燕	中国农业大学动物医学院	10	45	2.0	6.0