HMGB1分子A-Box的表达纯化及其促分化功能鉴定的研究

• 作者: 何梓铭 曹小芳 杨洋 王恒湘 王芳 郭子宽
• 来源期刊: 组织工程与重建外科杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 高迁移率族B1 A-box 间充质干细胞 成骨细胞
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 301-304
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3390字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-0364.2012.06.001

摘要

目的 克隆人HMGB1 A-box的cDNA,构建高效稳定的大肠杆菌(E.coli)表达菌株并对其诱导表达纯化,同时探讨其对间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)的促分化作用.方法 根据优选合成的HMGB1基因序列设计引物,PCR扩增目的基因片段,插入克隆载体pGEM-T并进行序列测定.重组克隆载体经BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切,琼脂糖凝胶电泳分离目的基因,插入含His标签的表达载体pET24a.将构建的质粒转染BL21大肠杆菌,经IPTG诱导后,SDS-PAGE观察表达量.HIS-link层析柱纯化重组人HMGB1 A-box,蛋白印迹鉴定重组蛋白.将重组蛋白加入hBMSC培养体系中培养一周后,碱性磷酸酶染色检测其促MSC成骨分化作用.结果 经RT-PCR扩增得到了261 bp的DNA片段,经测序分析,与GenBank中报道的已知序列完全一致,构建了含融合蛋白的重组表达质粒.经诱导后细菌高表达A-box,表达量为总蛋白的45％.经层析柱纯化后,蛋白印迹证实目的蛋白为高纯度的A-box.将A-box加入MSC培养体系中培养后,细胞活性无明显改变,但细胞碱性磷酸酶表达明显增高.结论 成功构建了重组人HMGB1 A-Box的表达载体,纯化的重组蛋白能有效促进MSC向成骨细胞分化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王恒湘		1	1	1.0	1.0