小鼠HMGB1 B box基因的原核表达及其活性鉴定

• 作者: 侯小强 冯娜 夏咸柱 孙培录 杨松涛 高玉伟
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 高迁移率族蛋白B1 B box 原核表达 活性鉴定
• 年，卷（期）: 2008,（10）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 872-875
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3389字
• 语种: 中文

摘要

目的:克隆小鼠HMGB1 B box基因,表达具有明显致炎活性的鼠HMGB1 B box蛋白,为深入研究其生物学功能以及新型抗炎制剂的研发奠定基础,也为进一步探讨其与H5N1禽流感病毒性肺炎的相关性奠定了基础.方法:从小鼠的肺脏组织中提取总RNA,经RT-PCR扩增小鼠HMGB1中的B box的cDNA,构建于载体pMD-18T并进行序列测定,随后构建于原核表达载体pET-28a(+)中.IPTG诱导4小时后可见Mr约13 000的蛋白.经Ni2+ 亲和层析柱纯化获得高纯度的HMGB1 B box 蛋白,然后用此蛋白刺激小鼠外周血单核细胞(PBMCs),作用6小时后用ELISA检测PBMCs释放TNF-α、IL-6的含量.结果:经RT-PCR扩增得到了240 bp的DNA片段,经序列分析与Genebank 中报道的已知序列完全一致;成功构建了含有HMGB1 B box编码序列的原核表达载体;纯化表达的HMGB1 B box蛋白能显著地刺激小鼠PBMCs释放致炎因子TNF-α、IL- 6,具有较好的生物活性.结论:原核表达的小鼠HMGB1 B box蛋白具有较好的生物活性,为进一步研究HMGB1 B box的作用机制以及新型抗炎制剂的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏咸柱	解放军军事医学科学院军事兽医研究所	59	634	15.0	23.0
2	杨松涛	解放军军事医学科学院军事兽医研究所	22	111	6.0	10.0
3	高玉伟	解放军军事医学科学院军事兽医研究所	21	197	6.0	14.0
4	冯娜	解放军军事医学科学院军事兽医研究所	6	1	1.0	1.0
5	侯小强	吉林大学畜牧兽医学院	6	31	4.0	5.0
6	孙培录	吉林大学畜牧兽医学院	3	13	2.0	3.0