O型口蹄疫病毒VP1基因及其多表位基因的原核表达与纯化鉴定

• 作者: 何奇松 冯淑萍 易春华 梁晟 许瑞胜 陈磊 韦达有 颜健华 黄胜斌
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: O型FMDV VP1基因 多表位基因 原核表达 纯化 鉴定
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 472-477
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2016.03.472

摘要

[目的]通过原核表达并纯化获得O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因及其多表位基因的重组蛋白,为建立O型FMDV抗体ELISA检测试剂盒及制备动物高免血清提供技术支持.[方法]以O型FMDV VP1全基因重组质粒pMD18-T-T-VP1及串联的ⅥP1多表位基因重组质粒pMD 18-T-O-VP1为模板,通过特异性引物扩增并回收目的基因,构建重组质粒pET-32a-VP1和pGEX-6p-1-VP1,然后转入大肠杆菌BL211 (DE3)中诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting对融合蛋白进行分析鉴定.[结果]O型FMDV的VP1基因及其多表位基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到正确表达,表达的两种融合蛋白主要以包涵体形式存在,纯度较高,且均能与猪抗O型FMDV阳性血清发生特异性结合,具有良好的反应原性.[结论]表达获得的融合蛋白具有良好的反应原性,可作为包被抗原应用于O型FMDV抗体检测试剂盒研发.