A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的原核表达、纯化及鉴定

• 作者: 何奇松 冯淑萍 易春华 梁晟 蒋家霞 许瑞胜 韦达有 颜健华 黄胜斌
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: A型FMDV VP1蛋白 原核表达 纯化 鉴定
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 301-305
• 页数: 5页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2016.02.301

摘要

[目的]通过原核表达及纯化获得A型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1,为建立A型FMDV的ELISA诊断方法及开发安全、高效、广谱的新型基因工程疫苗提供技术支持.[方法]以含A型FMDV VP1基因的重组质粒pMD18-T-A-VP1为模板,通过特异性引物扩增A型FMDV的VP1基因,构建表达质粒pET-32a-VP1和pGEX-6p-1-VP1,然后转入感受态细胞E.coli BL21 (DE3)中诱导表达融合蛋白.[结果]诱导表达获得的VP1融合蛋白主要以包涵体形式存在,分别经His· Bind和GST· Bind柱层析纯化,SDS-PAGE分析结果表明融合蛋白纯度较高;Western blotting检测分析发现,VP1融合蛋白能与豚鼠抗A型FMDV阳性血清发生特异性结合,但不与豚鼠抗O型和Asia1型FMDV阳性血清反应.[结论]经原核表达及纯化获得的A型FMDV VP1融合蛋白具有良好的特异性和抗原性,可用于易感动物的免疫及血清抗体筛查.