多重荧光定量PCR方法鉴定布鲁氏菌属及牛羊种布鲁氏菌研究

• 作者: 刘志国 姜海 崔步云 张利 朴东日 田国忠 罗成旺 赵鸿雁
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 布鲁氏菌 荧光定量聚合酶链式反应 鉴定 评价
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 869-874
• 分类号: R378.5
• 字数: 4973字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2012.09.002

摘要

目的 利用多重实时荧光PCR技术,建立快速鉴定布鲁氏菌的方法.方法 根据布鲁氏菌特异性基因BCSP31,AlkB/IS711和BMEI1162/IS711的部分片段作为靶基因,分别设计探针引物,将扩增产物连接到PUCm18-T载体上,制备标准品及标准曲线,确定此方法的灵敏度.利用布鲁氏菌的其他生物型菌株和同源性较近的致病菌(汉赛巴尔通体、霍乱弧菌、土拉弗朗西斯菌、大肠杆菌O157∶H7、大肠杆菌O∶16、小肠结肠炎耶尔森菌O∶9、沙门氏菌N群血清型、嗜麦芽假单胞菌)验证所建立方法的特异性.通过布鲁氏菌标准菌株建立方法,优化体系后扩增97株地方株进行验证.结果 应用多重TaqMan荧光PCR技术检测布鲁氏菌结果显示,布鲁氏菌属、牛种布鲁氏菌和羊种布鲁氏菌有各自的荧光信号,而与其同源性较高的致病菌均未见荧光信号;由标准曲线可知该方法的单重和多重荧光PCR最低检测下限均约为102copy/μL(13~24 fg /μL),是常规PCR灵敏度的100倍.结论 建立的方法有灵敏度高、快速易操作等优点,可用于布鲁氏菌快速鉴定,并同时确定是否为牛种或羊种布鲁氏菌.