基于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法的建立

• 作者: 姜海蓉 崔玉花 彭方毅 王晓亮 田莉莉 范伟兴
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 布鲁氏菌 荧光定量PCR 外源内参 内源内参
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 469-472
• 页数: 4页
• 分类号: R378
• 字数: 3568字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2016.05.010

摘要

目的 本文建立一种基于样品检测的特异性好、灵敏性高的布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法.方法 以哺乳动物beta-actin基因和外源重组质粒为内参,针对布鲁氏菌属特异性基因IS711,建立用于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法,并验证其敏感性、特异性及稳定性,绘制标准曲线.将该方法用于哺乳动物样品检测,并与细菌分离培养检测结果比较.结果 荧光定量PCR方法对布鲁氏菌检测有良好的特异性,3对引物对阴性对照菌均无非特异性扩增;该方法用于样品检测的最低检测限为17拷贝;内外源内参同时存在条件下,布鲁氏菌荧光定量PCR的标准曲线相关系数为R2=0.997(Y=-3.12X+40.9).将该方法直接用于181份动物样本的检测,并与分离培养结果相比,荧光定量PCR检测阳性率为11.4％,细菌分离培养检测阳性率为9.9％,且细菌分离培养阳性样品与荧光定量PCR阳性样品中编号基本一致.结论 本文建立的荧光定量PCR检测方法灵敏性高、特异性及稳定性好,可直接应用于样品的检测,检测结果受内参基因质控.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜海蓉	重庆理工大学药学与生物工程学院	22	126	6.0	10.0
2	崔玉花	重庆理工大学药学与生物工程学院	3	8	2.0	2.0
6	田莉莉		11	86	4.0	9.0
7	王晓亮		8	8	2.0	2.0
8	范伟兴		54	531	12.0	21.0
9	彭方毅		23	137	6.0	10.0