布鲁菌Cycling探针荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 南文龙 周洁 毛开荣 许邹亮 谭鹏飞 陆明哲 陈义平
• 来源期刊: 中国兽医杂志
• 关键词: 布鲁菌 Cycling探针荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 调查研究
• 页码范围: 13-16
• 分类号: S855.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0529-6005.2012.02.004

摘要

根据布鲁菌BCSP31基因序列设计布鲁菌通用检测引物和探针,建立了布鲁菌Cycling探针荧光定量PCR检测方法.以构建的含BCSP31基因的质粒标准品10倍递进稀释为模板检测其敏感性,结果显示,本方法能检测约10个拷贝的阳性质粒,且标准曲线的线性关系良好.用本方法检测5株不同种的布鲁菌以及猪大肠杆菌K99、巴氏杆菌C48-1、猪链球菌ST171、绿脓杆菌等4株对照菌.结果显示,5株不同种的布鲁菌均出现典型的“S”型扩增曲线,4株对照菌40个循环内均无CT值出现.用本方法和B4/BS-PCR方法对来自布鲁菌病流行地区3个不同牛场的40份血样、奶样和血清样进行平行检测.结果显示,本方法和B4/B5-PCR方法的结果符合率为80.0％.B4/B5-PCR检测为阳性的27份样品经本方法检测均为阳性；B4/B5-PCR检测为阴性的13份样本,经本方法检测,其中8份呈阳性,5份为阴性.本方法的敏感性明显高于B4/B5-PCR方法.试验表明,所建立的Cycling探针荧光定量PCR方法具有敏感、特异、稳定等特点,可用于布鲁菌感染的快速检测.