TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测布鲁氏菌

• 作者: 冯育芳 岳秉飞 贺争鸣 邢进 高正琴
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 布鲁氏菌 小沟结合物(minor groove binder,MGB)探针 实时荧光定量PCR 检测
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 995-1000
• 分类号: R378.5
• 字数: 6026字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2011.11.011

摘要

目的 利用新一代TaqMan MGB探针技术,建立特异敏感的实时荧光定量PCR方法,用于布鲁氏菌的快速检测.方法 针对布鲁氏菌基因组中16S rRNA序列设计特异性引物和探针,建立一套基于TaqMan MGB探针技术的实时荧光定量PCR方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性,对2008- 2010年期间采集的773份动物样本中的布鲁氏菌进行检测,并与普通PCR方法进行比较分析.结果 建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对布鲁氏菌的检测具有高度的特异性,对小肠结肠耶尔森菌、假结核耶尔森菌、肠炎沙门氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、空肠弯曲菌、泰泽氏菌均无交叉反应.生成的标准曲线的相关系数为0.999,斜率为-3.301,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR效率为100.872％.TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR能够准确地从布鲁氏菌阳性样本中检测到布鲁氏菌DNA,最低能够检测到的布鲁氏菌数量为9.3拷贝,比常规PCR方法的灵敏度高100倍.对773份动物样本进行检测,结果TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR能检出53份布鲁氏菌阳性样本,而常规PCR只检出37份阳性.结果显示,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比常规PCR方法更敏感,能够直接从动物样本中检出布鲁氏菌DNA,检测时间仅为2h.结论 本研究首次建立了直接用于检测动物样本中布鲁氏菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法,该技术适用于传染性病原体的快速检测与鉴定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	岳秉飞		117	385	11.0	14.0
2	贺争鸣		100	337	9.0	14.0
3	邢进		40	208	8.0	13.0
4	冯育芳		37	169	7.0	11.0
5	高正琴		23	103	5.0	9.0