弗氏志贺菌ΔlysA突变株的构建及SILAC技术的应用尝试

• 作者: 冯尔玲 刘先凯 朱力 李月玥 王恒樑 陈福生
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 志贺菌,弗氏 赖氨酸营养缺陷型突变株 基因缺失 λ-Red重组系统 双向电泳 SILAC
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 345-350
• 分类号: R378.25
• 字数: 4552字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2012.05.007

摘要

目的 构建弗氏2a志贺菌301株赖氨酸营养缺陷型突变株,为将细胞培养条件下稳定同位素标记(SILAC)技术应用于志贺菌蛋白质组学研究奠定基础.方法 采用λ-Red重组系统对弗氏2a志贺菌301株lysA基因进行缺失,对野生株和突变株进行基本的表型测评和毒力评价,并利用双向电泳技术比较二者在全菌蛋白表达谱上的差异,最后将突变株分别在含有12C6-赖氨酸和13C6-赖氨酸的培养基中培养,根据双向电泳胶图取对应蛋白点进行胶内酶切及MALDI-TOF/TOF分析.结果 成功构建了301 lysA基因缺失突变株,蛋白鉴定结果显示所取对应蛋白点为同一蛋白,在质谱图上轻重同位素峰位移为6 amu.结论 本研究所构建的赖氨酸营养缺陷型突变株适合进行SILAC分析.