志贺菌rfbA基因突变体的构建

• 作者: 冯尔玲 刘先凯 宋丽 朱力 熊勇华 牛畅 王恒樑 白国旺 魏华
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 志贺菌属 志贺菌,弗氏 脂多糖类 基因缺失 突变
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 短篇论著
• 页码范围: 399-400,封3
• 分类号: R378.25
• 字数: 3660字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2012.05.021

摘要

目的 构建弗氏2a志贺菌301 rfbA基因缺失突变株,初步探究志贺菌脂多糖合成与糖蛋白合成通路是否相关.方法 首先用PCR扩增出rfbA基因上下游同源臂,构建含有kan基因的打靶片段,采用λ-Red重组系统对rfbA基因进行缺失,用PCR进行初步验证,然后通过LPS的银染方法进行进一步验证.随后,制备野生株、rfbA缺失突变株的全菌蛋白样品,进行双向电泳后比较野生株301和rfbA缺失株的蛋白表达谱.结果 成功构建了301 rfbA缺失突变株.在LPS的银染实验中,rfbA突变株在凝胶中未形成一长串的梯状条带.在双向电泳实验中,野生株和突变株没有明显的蛋白差异点.结论 获得了301 rfbA基因缺失突变体,初步认为志贺菌中不存在与脂多糖O-抗原合成相关的蛋白糖基化途径.