用PCR定点突变法构建人抗菌肽FALL-39基因突变体及其功能的研究

• 作者: 冯云 杨云霞 王伯瑶
• 来源期刊: 中国抗生素杂志
• 关键词: 人抗菌肽FALL-39 聚合酶链反应 定点突变 抗菌活性 溶血作用
• 年，卷（期）: 2003,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 299-303
• 页数: 5页
• 分类号: Q754
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-8689.2003.05.014

摘要

目的用PCR定点突变法构建人抗菌肽FALL-39基因突变体,并比较研究FALL-39及其突变肽的功能.方法采用PCR体外定点突变技术(PCR-SDM),设计一对方向相反的引物,其中一个引物引入一个突变点,应用高保真的Polybest DNA多聚酶进行含FALL-39肽的PGEXλ1T质粒的PCR扩增,使FALL-39第24位密码子由CAG变为AAG,将扩增片段自身连接后克隆入工程菌JM109中表达其突变肽(FALL-39-lys24),纯化后与FALL-39进行抗菌活性比较.结果DNA测序结果表明在预期位点发生突变,突变后FALL-39-lys24抗菌活性增强,在抗菌剂量时对红细胞的溶解作用未见明显增加,较大剂量时对红细胞的溶解作用略有增加.结论用高保真的Polybest DNA多聚酶进行PCR定点突变技术简单、有效,获得一个FALL-39-Lys24突变子;其表达分子的抗菌活性明显增强,对红细胞的溶解作用在抗菌剂量时未见明显增加.较大剂量时略有增加,这些结果提示在FALL-39分子中增加碱性氨基酸可以增强其抗菌活性,但必须注意避免溶血的副作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯云	四川大学华西医学中心	57	195	8.0	11.0
2	王伯瑶	四川大学华西医学中心	91	353	10.0	16.0
3	杨云霞	四川大学华西医学中心	64	316	10.0	14.0