人抗菌肽FALL-39基因定点突变体的构建及其大肠杆菌表达产物的抗菌活性研究

• 作者: 冯云 杨云霞 王伯瑶
• 来源期刊: 四川大学学报(医学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: FALL-39 定点突变 二步PCR 抗菌活性
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 390-394
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 字数: 3167字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2003.03.004

摘要

目的构建人抗菌肽FALL-39定点突变子及研究其抗菌活性.方法采用PCR体外定点突变技术(PCR-SDM),设计两对引物,引入一个突变点,通过重叠延伸法两次PCR扩增,使FALL-39第32位密码子由AAT突变为AAG,将扩增片段克隆入PGEXλ1T质粒中, 转化大肠杆菌JM109,并用IPTG诱导,表达的FALL-39-lys32经纯化后与FALL-39进行抗菌活性比较.结果 DNA测序结果表明在预期位点发生突变,突变后的FALL-39-lys32蛋白对大肠杆菌ML-35p的抗菌活性明显增强,其最低抑菌浓度 (MIC)和最低杀菌浓度(MBC)分别由FALL-39蛋白的18.75和37.50 μg/ml降低为FALL-39-Lys-32的10.94和21.88 μg/ml,对绿脓杆菌ATCC27853的MIC和MBC值分别为FALL-39蛋白的31.25和37.50 μg/ml降低为FALL-39-Lys-32的18.75和31.25 μg/ml.两种蛋白均在含Medium E的LB培养基中表现出较高活性,在LB培养基中抗菌活性最低,但在同一种培养基中FALL-39-Lys-32蛋白抗菌活性要高于FALL-39蛋白.结论用两步PCR定点突变技术获得一个FALL-39-Lys32 突变子,其表达分子的抗菌活性明显增强,提示在FALL-39分子中增加碱性氨基酸可以增强其抗菌活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯云	四川大学华西基础医学与法医学院感染与免疫研究室	57	195	8.0	11.0
2	王伯瑶	四川大学华西基础医学与法医学院感染与免疫研究室	91	353	10.0	16.0
3	杨云霞	四川大学华西基础医学与法医学院药理学教研室	64	316	10.0	14.0