抗菌肽2IQ3及其突变体的原核表达与纯化

• 作者: 倪天治 张雪燕 徐攀 杜振亚 王玉平 谢俊秋 韩跃武 马如超 马驰
• 来源期刊: 兰州大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 抗菌肽 突变体 大肠杆菌 纯化
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 20-23
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3023字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13885/j.issn.1000-2812.2015.03.004

摘要

目的：将抗菌肽2IQ3及其突变体基因进行原核表达，经纯化获得目的蛋白。方法根据2IQ3氨基酸序列及大肠杆菌偏爱密码原则设计并合成2IQ3基因编码的核苷酸片段，采用重叠延伸聚合酶链反应法扩增抗菌肽2IQ3及突变体基因，克隆至载体pET-28a(＋)中，构建重组表达质粒，转化至大肠杆菌BL21中，经异丙基硫代半乳糖苷诱导表达，分析重组蛋白的表达形式，纯化重组蛋白。结果构建的抗菌肽2IQ3及其突变体基因所表达的重组蛋白，经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定，有特异性目的条带出现，纯化的重组蛋白纯度达97%左右，浓度为0.502 mg/mL。结论成功构建了抗菌肽2IQ3及其突变体基因的原核表达体系，并在大肠杆菌中进行表达、纯化，为进一步研究其生物学活性奠定了基础。