UHRF2结构域突变体的原核表达与纯化

• 作者: 杨艳 段昌柱 白露 胡斌
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: UHRF2 结构域突变体 GST融合蛋白 ICBP90 表观遗传学
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 98-102
• 分类号: Q71
• 字数: 3433字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2012.02.005

摘要

目的 构建 UHRF2 各个以结构域为基础的突变体原核表达载体,在大肠埃希菌中表达并对融合蛋白进行纯化和鉴定.方法 以 pCMV-3xFlag-UHRF2 为模板,PCR 扩增 UHRF2 的各个结构域基因片段,各 PCR 产物经酶切后连接到 pGEX-4T-1 载体上;将重组载体转化大肠埃希菌 (BL21菌株),IPTG 诱导表达各 GST 融合蛋白,超声波破碎细菌,离心收获蛋白并经谷胱甘肽琼脂糖凝胶 4B(glutathione sepharose 4B) 亲合纯化;纯化的蛋白经 SDS-PAGE 电泳后用考马斯亮蓝染色或免疫印记实验鉴定各蛋白表达情况.结果 成功构建了 UHRF2 结构域突变体的原核表达载体,各突变体蛋白表达正确.结论 UHRF2 各结构域突变体的成功构建便于用 GST pull-down 实验研究 UHRF2 参与与其它蛋白相互作用的结构域,为了解UHRF2 功能打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨艳	重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心	14	107	5.0	10.0
2	段昌柱	重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心	35	120	7.0	9.0
3	胡斌	重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心	6	7	1.0	2.0
4	白露	重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心	3	1	1.0	1.0