橡胶树HbJAZ3突变体蛋白的原核表达及纯化

• 作者: 何鑫 吴绍华 田维敏 邓顺楠 陈月异
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 巴西橡胶树 HbJAZ3 原核表达 定点突变技术 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 生物技术与组织培养
• 页码范围: 1902-1906
• 页数: 5页
• 分类号: S794.1
• 字数: 2705字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2013.10.009

摘要

植物JAZ蛋白是茉莉酸信号调控途径的关键环节之一.HbJAZ3基因是橡胶树乳管细胞中编码JAZ蛋白的基因家族成员之一.本文采用原核表达和定点突变技术,构建了pET28a(+)-JAZ3、pET28a(+)-JAZ3-ZIM-mut(缺失ZIM结构域中TIFY基序)和pET28a(+)-JAZ3-Jas-mut(缺失Jas结构域的保守氨基酸FLEKRK)的His标签融合蛋白表达载体,并成功转化大肠杆菌Rosetta(DE3).在37℃条件下,用1 mmol/L IPTG诱导2h能够诱导目的蛋白以包涵体的形式大量表达.通过镍柱纯化了目的蛋白,获得了HbJAZ3及其ZIM结构域和Jas结构域的突变体蛋白,为进步一鉴定乳管细胞茉莉酸信号途径的关键环节打下了良好基础.