Cx43基因干扰对大鼠星形胶质细胞谷氨酸基础释放的影响

• 作者: 牛建钦 王凌云 田衍平 肖岚
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 连接蛋白43 siRNA 星形胶质细胞 谷氨酸
• 年，卷（期）: 2012,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 701-704
• 分类号: R-332|R338|R363.27
• 语种: 中文

摘要

目的 构建能有效抑制大鼠星形胶质细胞(astrocytes,ASTs)连接蛋白43(connexin 43,Cx43)基因表达的siRNA载体,并检测抑制Cx43表达对星形胶质细胞谷氨酸释放的影响.方法 合成针对大鼠Cx43基因的siRNA寡核苷酸,构建pGCsi.U6.neo.GFP质粒载体.质粒通过电转方法转染原代星形胶质细胞后,用免疫荧光染色及Western blot检测转染干扰质粒对大鼠ASTs Cx43蛋白表达的影响.用谷氨酸ELISA定量试剂盒检测释放至培养基中谷氨酸的浓度,并用DAPI染色进行细胞计数.结果 测序结果显示,Cx43基因的目的片段正确插入载体,并保持正确的读码框.干扰质粒转染ASTs 48 h后与对照组相比,Cx43蛋白表达明显下降(P＜0.05),细胞存活未受影响,而谷氨酸释放明显减少(P＜0.05).结论 成功构建了抑制大鼠Cx43基因表达的siRNA载体,抑制Cx43表达可降低ASTs谷氨酸的基础释放.