基于颜色判定的逆转录环介导等温扩增技术检测GⅡ型诺如病毒基因

• 作者: 吴希阳 徐子乾 曾亚岚 杨梦婕 段招军 罗乐 罗剑鸣 聂凯 马学军
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 逆转录环介导等温扩增 GⅡ型诺如病毒
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 165-171
• 页数: 7页
• 分类号: R373.2|Q78
• 语种: 中文

摘要

建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)方法应用于GⅡ型诺如病毒基因检测.针对诺如病毒RNA依赖的RNA聚合酶和衣壳蛋白基因序列(RNA-dependant RNA polymerase and eapsid protein gene)设计出6条特异引物,在等温条件下(65℃)进行扩增反应60min.在扩增前加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为反应指示剂,以其颜色变化作为结果判断标准,并经琼脂糖凝胶电泳验证.本文利用此技术对不同腹泻病毒进行了特异性分析,对体外转录的GⅡ型诺如病毒RNA的梯度稀释进行了灵敏度分析,同时与逆转录PCR (RT-PCR)方法进行比较,并对93份腹泻患者粪便中的病毒核酸进行了检测.结果显示,本研究建立的RT-LAMP方法特异性高,灵敏度达到1 000拷贝/μLRNA分子水平,与常规检测RT-PCR方法相当.对临床标本的阳性检出率也与常规RT-PCR相当.由于此方法特异性强,灵敏度较高,耗时短,结果直观,因此有望用于GⅡ型诺如病毒的现场快速检测.