腺病毒介导的shRNA下调PTEN表达对体外活化肝星状细胞增殖与凋亡的影响

• 作者: 刘小娟 刘林力 刘蕾 姚冬梅 孙慧聪 宋梅 张国尊 张晓岚 郭剑 郭金波
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝星状细胞 第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因 RNA干扰 细胞增殖 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1627-1632
• 分类号: R363
• 字数: 4892字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2012.09.016

摘要

目的:探讨腺病毒介导的shRNA下调第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)表达对体外培养的大鼠活化肝星状细胞(HSCs)增殖和凋亡的影响及其信号转导机制.方法:体外培养活化HSCs,以腺病毒为载体将靶向PTEN的shRNA干扰重组体转染至体外活化的大鼠HSCs;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HSCs增殖;末端转移酶标记技术(TUNEL)及流式细胞术测定HSCs凋亡;Western blotting方法检测PTEN、Bax、Bcl-2、Akt、p-Akt、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达情况;实时荧光定量PCR方法检测PTEN、Akt及ERK1 mRNA表达情况.结果:(1) 靶向PTEN的RNA干扰重组腺病毒成功感染体外活化HSCs,并在一定范围内呈时间依赖性地促进HSCs增殖,腺病毒感染HSCs后72 h,HSCs凋亡率显著下降(P<0.05);(2) Bax表达降低,Bcl-2表达增加(P<0.05);(3) p-Akt和p-ERK1/2蛋白表达显著增加(P<0.05);而Akt蛋白及其mRNA、ERK1蛋白及其mRNA表达均无显著改变(P>0.05).结论:RNA干扰下调PTEN基因表达可能通过Bcl-2/Bax途径促进体外活化HSCs增殖并抑制其凋亡,此外,RNA干扰下调PTEN基因表达促进p-Akt和p-ERK1/2表达增多,提示PTEN可能通过影响PI3K/Akt和ERK1/2信号通路而在调控HSCs增殖和凋亡中发挥重要作用.