腺病毒介导的shRNA下调PTEN表达对活化肝星状细胞骨架蛋白F-actin的影响

• 作者: 刘博 宋小杰 张明婷 张朋垒 王静 章广玲 郝礼森 靳丽敏
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: PTEN RNA干扰 肝星状细胞 细胞骨架 纤丝状肌动蛋白
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 所属期刊栏目: 短篇论著
• 页码范围: 557-561,566
• 页数: 6页
• 分类号: R363.2
• 字数: 4242字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2017.03.030

摘要

目的:探讨腺病毒介导的shRNA下调第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN)基因表达对体外培养的活化肝星状细胞(HSC)纤丝状肌动蛋白(F-actin)的影响.方法:体外培养大鼠活化HSC(HSC-T6),将携带靶向PTEN的RNA干扰序列[短发夹RNA(shRNA)]并表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN及仅表达GFP的对照空病毒Ad-GFP转染HSC,实时荧光定量PCR及Western blotting实验检测HSC的PTEN mRNA及蛋白表达;利用激光扫描共聚焦显微镜检测HSC的形态、F-actin的分布及荧光强度、伪足以及应力纤维的变化,并采用钙荧光探针Rhod-2/AM负载检测HSC内Ca2+浓度的变化.实验分为对照(control)组(在腺病毒转染步骤以DMEM代替腺病毒液)、Ad-GFP组(转染表达GFP的空病毒Ad-GFP)和Ad-shRNA/PTEN组(转染重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN).结果:靶向PTEN的shRNA成功转染体外活化HSC,显著下调HSC的PTEN mR-NA及蛋白表达(P<0.05);PTEN表达下调使活化HSC呈星形向四周伸展,F-actin排列紧密规则,数量增多,伪足充分向外伸展,应力纤维丝增长增粗;Ad-shRNA/PTEN组F-actin的荧光强度较control组及Ad-GFP组显著增强(P<0.05),而control组与Ad-GFP组间差异无统计学显著性;Ad-shRNA/PTEN组HSC内Ca2+浓度较control组及Ad-GFP组明显升高(P<0.05),而control组与Ad-GFP组间差异无统计学显著性.结论:PTEN表达下调使体外活化肝星状细胞骨架蛋白F-actin的形成及细胞骨架的重构增强,并增加了HSC内的Ca2浓度.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郝礼森	华北理工大学附属医院消化内科	13	43	5.0	5.0
2	刘博	华北理工大学附属医院消化内科	10	14	3.0	3.0
3	宋小杰	华北理工大学附属医院消化内科	3	9	2.0	3.0
4	章广玲	华北理工大学基础医学院	12	24	4.0	4.0
5	张朋垒	华北理工大学附属医院消化内科	4	8	2.0	2.0
6	靳丽敏		6	13	3.0	3.0
7	王静	华北理工大学附属医院消化内科	17	29	4.0	5.0
8	张明婷	华北理工大学附属医院消化内科	6	20	4.0	4.0