晶状体上皮细胞启动子LEP503调控的自杀基因系统细胞特异性表达研究

• 作者: 刘天津 卢奕 吴新华 杨晋 蒋永祥
• 来源期刊: 中华眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒属 整合酶类 基因表达调控 基因,转基因,自杀 DNA结合蛋白质类 晶体 上皮细胞
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 829-835
• 分类号: R77
• 字数: 6606字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0412-4081.2012.09.014

摘要

目的 探讨人晶状体上皮细胞(HLEC)特异性启动子LEP503调控的Cre/LoxP增强型自杀基因(HSV-tk/GCV)系统在眼内主要细胞中的特异性表达及杀伤作用.方法 实验研究.利用分子克隆技术,构建HLEC特异性启动子LEP503调控的HSV-tk/GCV系统并进行慢病毒包装.分别在HLEC、视网膜色素上皮细胞(RPEC)、小鼠成纤维细胞(NIH3T3)、293T细胞中转人此系统,3d后观察4组细胞增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达情况,并收集HLEC和RPEC,通过RT-PCR检测HSV-tk的表达差异.20 mg/L丙氧鸟苷(GCV)作用后,CCK-8试剂盒和流式细胞仪检测HSV-tk/GCV系统对HLEC和RPEC的杀伤作用.采用单因素方差分析Scheffe两两比较法对各组RPEC活性进行比较.结果 HSV-tk/GCV系统在RPEC、NIH3T3、293T细胞中EGFP表达效率分别为62.3％,68.3％,75.8％；在HLEC中EGFP表达效率为17.5％.RT-PCR检测显示HLEC内有较高的HSV-tk表达,相对灰度值为4.01,而RPEC中HSV-tk表达微弱,相对灰度值为0.29.20 mg/L GCV作用72 h后流式细胞仪检测:HLEC组的细胞凋亡率为76.51％,而RPEC组仅为2.44％.CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制情况显示:20 mg/L GCV作用72 h后LEP503调控的HSV-tk/GCV转染的RPEC活性0.9198 ±0.06与正常RPE组0.9672±0.02和阴性对照RPE组0.8927±0.07相比,差异无统计学意义[组间均数差值(MD)分别为MD1=-0.047,P=0.671；MD2 =0.027,P=0.912].结论 HLEC特异性启动子LEP503调控的Cre/LoxP增强型自杀基因系统在HLEC中能特异性表达HSV-tk,GCV作用后可特异性抑制HLEC增殖,但对RPEC无明显杀伤作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢奕	复旦大学附属眼耳鼻喉医院眼科	142	511	11.0	15.0
2	吴新华	复旦大学附属眼耳鼻喉医院眼科	12	51	4.0	7.0
3	杨晋	复旦大学附属眼耳鼻喉医院眼科	21	58	5.0	7.0
4	蒋永祥	复旦大学附属眼耳鼻喉医院眼科	39	140	7.0	9.0
5	刘天津	中国科学院上海细胞生物学研究所	12	83	6.0	8.0