利用PTVA法提高超氧化物歧化酶基因在毕赤酵母中的表达

• 作者: 李潇楠 王爽 王琦
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 毕赤酵母 超氧化物歧化酶 质粒转化后扩增法 基因拷贝数 MMH平板检测法
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 页码范围: 88-93
• 分类号: Q344.13
• 语种: 中文

摘要

为得到高表达超氧化物歧化酶毕赤酵母工程菌株,促进SOD的产业化生产,将来源于蜡样芽孢杆菌M22菌株的Mn-SOD-2基因转入毕赤酵母GS115中,构建了表达工程菌株YS 1～100。采用PTVA法（Posttransformational vector amplification）进行拷贝数扩增处理。建立了SOD重组菌株MMH（Minimal Methanol＋Histidine）平板简易检测法,使用该法对转化子进行初筛,并用荧光定量PCR（Fluorescence quantitative PCR）法检测部分重组酵母工程菌中外源SOD基因的拷贝数。结果表明：试验中得到80株高抗Zeocin的菌株YSP 1～80,经MMH平板法筛选得到菌株YSP14、YSP30、YSP48和YSP54的SOD酶活性明显高于处理前;菌株YSP54的SOD基因的拷贝数达到8个拷贝,而处理前仅为1个拷贝;Native-Page分析与NBT酶活性测定显示菌株YSP54发酵上清液中的SOD酶活性达到150U/mL,为处理前的2倍。提高毕赤酵母中外源SOD基因的拷贝数可以相应提高SOD的酶活。