大鼠microRNA-145慢病毒表达载体的构建及其对血管平滑肌细胞表型转化的影响

• 作者: 卫娜 王泽慧 肖传实 车星星 边云飞
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: microRNA-145 慢病毒表达载体 血管平滑肌细胞 表型转化
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 424-428
• 分类号: R363
• 语种: 中文

摘要

目的 构建针对Rno-iR-145的慢病毒表达载体并探讨其在血小板源生长因子(PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用.方法 人工合成驶有酶切位点粘端miR-145 shDNA双链模板序列,克隆于LV3 pGLV/H1/GFP+ Puro-miRNA慢病毒穿梭载体中,转染293T细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染大鼠原代VSMC,倒置荧光显微镜下观察VSMC感染后的荧光表达情况,实时荧光定量PCR检测miR-145的表达情况；实验分为空白对照组、PDGF组、PDGF+ miR-145组和细胞转染阴性慢病毒载体组(miR-NC组)；采用实时荧光定量PCR测定miR-145对VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun及分化相关基因SM22α mRNA表达水平的影响.结果 成功构建了microRNA-145慢病毒载体,测定病毒滴度为1×109TU/mL.倒置荧光显微镜下观察大鼠microRNA-145慢病毒表达载体感染成功,MOI值为50,感染72h时感染率最高.实时荧光定量PCR结果显示PDGF可使PCNA、c-Jun表达增加,而使SM22α表达降低；miR-145可使PDGF诱导的去分化型VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun表达降低,分化相关基因SM22α表达增加.结论 miR-145慢病毒载体可高效感染大鼠原代VSMC.感染miR-145慢病毒后可抑制VSMC的表型转化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	边云飞		158	668	12.0	15.0
2	肖传实	山西医科大学第一医院心内科	234	1162	15.0	21.0
3	王泽慧		5	11	2.0	3.0
4	卫娜		7	32	3.0	5.0
5	车星星		8	25	3.0	4.0