重组海参溶菌酶C端基因(SjLys-C)的可溶性表达和抑菌活性分析

• 作者: 丛丽娜 卢冬 常艺海 王红英
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 每参溶菌酶 重组蚩白SjLys-C 可溶性蛋白 分离纯化 生物活性
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 443-450
• 分类号: S511
• 字数: 6650字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2012.04.014

摘要

为进一步研究海参(Stichopus japonicus)溶菌酶基因(Sjys)(Genbank登录号:EF036468)中不司片段表达产物的生物特性,本研究通过对其cDNA片段的分析,发现C端基因区域所对应的蛋白质序列中含有非酶活性.根据已知的海参溶菌酶的cDNA序列,设计山含有Nco Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点的特异性引物,从新鲜的海参肠中提取总RNA,以其为模板利用RT-PCR扩增出长度为259 bp的溶菌酶C端(SjLys-C)基因.将该目的基因连接到pET-32a(+)载体上,构建重组质粒pET-32a(+)-SjLys-C,再转化至大肠杆菌(Escherichia coli)Rosetta(DE3)pLysS,成功地构建了重组蛋白SjLys-C的基因工程菌.利用该工程菌诱导发酵,结果显示它能高效表达出26 kD左右的重组蚩白SjLys-C.经过Western blot分析,该重组蛋白在26 kD左右能够与Penta-His抗体发生特异性免疫反应.对纯化的重组蛋白SjLys-C进行了抑菌特性的分析,结果发现它对溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)和副溶血弧菌(Vibrio parahae molytic us)有较高的抑菌活性.此外,将该重组蛋白经100℃、40 min处理后,其抑菌能力提高了5％～21％.研究结果表明,重组蛋白SjLys-C基因工程菌能够制备出具有可溶性的、并具有抑菌活性的重组蛋白SjLys-C,在农业和医药等行业中有潜在应用和开发价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王红英	大连工业大学辽宁省发酵工程重点实验室	39	143	7.0	9.0
2	丛丽娜	大连工业大学辽宁省发酵工程重点实验室	57	255	8.0	14.0
3	卢冬	大连工业大学辽宁省发酵工程重点实验室	4	8	1.0	2.0
4	常艺海	大连工业大学辽宁省发酵工程重点实验室	3	12	2.0	3.0