地高辛标记核酸病理形态学检测方法的建立及应用

• 作者: 丁蕾 勾文峰 杨雪 肖丽君 郑华川 高野康雄
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 原位杂交 原位PCR 核酸 病理形态学检测
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 977-980
• 页数: 4页
• 分类号: Q503
• 字数: 2673字
• 语种: 中文

摘要

目的 建立地高辛标记原位杂交(ISH)和原位PCR(ISP)方法,探讨其在病理形态学检测中的应用.方法 以细胞cDNA或质粒DNA为模板制备地高辛探针,ISH检测肺癌、胃癌或结直肠癌切片上JCV T抗原DNA、beclin 1和SERCA3 mRNA表达水平.在肺癌和胃癌切片上扩增地高辛标记的JCV T抗原DNA.杂交或标记后,进行抗地高辛碱性磷酸酶反应并行NBT/BCIP或Fuchsin显色.结果 PCR扩增获得高纯度地高辛标记DNA探针,甲酰胺杂交液杂交显示JCV T抗原存在于JCI细胞的细胞核中,beclin 1和SERCA3 mRNA阳性信号见于结肠癌和癌旁黏膜上皮细胞质中.ISP扩增了地高辛标记的JCV T抗原DNA,显色后发现JCV T抗原主要定位在JCI细胞、肺泡上皮细胞和肺癌细胞核、胃癌及癌旁黏膜细胞核中.NBT/BCIP显色比Fuchsin显色更为敏感,甲基绿复染使得上述2种显色更加清晰.结论 地高辛标记的ISH和ISP操作简便,敏感度高,NBT/BCIP显色和甲基绿复染图像美观.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖丽君	承德医学院基础部免疫教研室	52	170	8.0	10.0
2	丁蕾	解放军463医院检验科	1	0	0.0	0.0