美国黑核桃SSR反应体系优化

• 作者: Keith E.Wosete 张硕新 程飞 赵鹏
• 来源期刊: 植物研究
• 学科: 农学
• 关键词: 黑核桃 微卫星 反应体系 群体遗传
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 213-221
• 页数: 9页
• 分类号: S664.1
• 语种: 中文

摘要

优化SSR-PCR反应体系是黑核桃(Juglans nigra L.)SSR基因鉴定和群体遗传等研究的基础.本研究通过对PCR反应中Mg2+浓度、牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)浓度、Taq聚合酶用量、dNTPs浓度、引物浓度和模板DNA量的组合以及PCR程序组合试验,确定了黑核桃SSR的最佳反应体系,即在10 μL的PCR反应体系中,含10 ng模板DNA,0.1 mg·mL-1牛血清蛋白(BSA),0.25 mmol·L-1 dNTPs,1.5 mmol·L-1 Mg2+1 μL 10XTaq DNA聚合酶反应缓冲液,0.5U Taq聚合酶,1.0 mmol·L-1单对引物(0.5mmol· L-13对引物).SSR-PCR反应扩增程序为:94℃变性3 min;93℃变性15s,50℃或者53.5℃退火1 min,72℃延伸30 s,32个循环；72℃后延伸10min,置4℃保存.利用此反应体系对黑核桃进行PCR扩增并电泳检测,其结果清晰、稳定、可靠,适合进一步对黑核桃群体遗传、基因型鉴定和分子生态研究.