下调Cbp分子促进GPI锚固蛋白CD59参与T细胞活化

• 作者: 姬静 张树超 张蓓 王冰 王娟 高美华
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: shRNA Cbp CD59 Jurkat细胞 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 1019-1023
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 语种: 中文

摘要

目的 采用RNA干扰技术构建针对Cbp基因的pSUPER-siCbp重组载体,以建立其高效转染表达体系.方法 设计针对Cbp基因的寡核苷酸序列,克隆至线性化的pSUPER载体中并进行鉴定.采用电转染方法转染Jurkat细胞,荧光显微镜观察GFP基因表达,并行RT-PCR和Western blot检测转染细胞中Cbp的表达.利用噻唑蓝(MTT)比色法检测转染重组载体前后各组Jurkat细胞的增殖效应；应用ELISA检测细胞上清中白介素2(IL-2)的变化水平,比较各组差异.结果 经过限制性内切酶双酶切分析、DNA PCR和DNA测序鉴定,证实重组质粒pSUPER-siCbp的序列正确.转染重组质粒的Jurkat细胞,可表达绿色荧光蛋白,转染J2-pSUPER-siCbp重组质粒的Jurkat细胞中Cbp基因表达量明显低于其他各组；其细胞增殖能力,IL-2分泌高于其他各组.结论 成功构建了靶向人Cbp基因的pSUPER-siCbp载体,转染Jurkat细胞中Cbp表达降低,为以后的CD59与Cbp在T细胞信号转导通路中相互作用研究奠定了基础.