突变人CD59分子糖基化前后抗补体活性的变化

• 作者: 任书荣 高美华
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 分子生物学 突变人CD59抗补体活性的变化 真核表达 基因定点突变 CHO细胞 染料释放试验 糖基化
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 9-12
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 3345字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3949.2006.01.003

摘要

目的探讨2种突变CD59分子(HM3、HM4)糖基化前后抗补体活性的变化,为糖尿病血管增殖的发生机制提供理论基础.方法采用重组聚合酶链反应定点诱变技术在CD59易于糖基化的位点"41位赖氨酸-44位组氨酸"将44位的组氨酸基因位置改变,构建2种不同的CD59突变基因,克隆入真核表达质粒pALTER-MAX.利用阳离子脂质体将重组质粒和pcDNA3共转染中国仓鼠卵巢细胞.G418筛选稳定转染细胞克隆,免疫标记技术检测筛选突变CD59基因蛋白高表达株.染料释放实验检测突变CD59分子糖基化前后抗补体活性.结果序列测定及酶切鉴定均证实成功构建了pALTER-突变CD59重组真核表达载体系统.经酶免疫组织化学、荧光免疫组织化学和流式细胞术鉴定出较高表达突变CD59分子的阳性细胞克隆.免疫印迹技术检测出阳性细胞克隆裂解液中有1条相对分子质量约20 000的CD59蛋白表达带.染料释放实验初步证实突变CD59分子具有抗补体活性,糖基化后抗补体活性明显降低.结论2种突变CD59分子均具有抗补体活性,高糖环境下易被糖基化,糖基化后抗补体活性明显降低,为进一步研究糖尿病血管增殖的发生机制提供了线索.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高美华	青岛大学医学院免疫学教研室	181	728	12.0	19.0
2	任书荣	青岛大学医学院免疫学教研室	28	87	4.0	8.0