CD59分子W40位点基因缺失的构建与活性检测

• 作者: 任书荣 张丽 张艳丽 朱新红 王秋波 王静 高美华
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CD59 基因突变 真核表达 Overlap PCR 补体
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 295-299
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4825字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建突变型CD59重组质粒,建立高效真核表达系统,探讨W40位点的生物学活性.方法:采用基因点突变技术使CD59 W40基因位置缺失,各设计两条互补突变引物和两条常规引物,以已构建的CD59 cDNA为模板,三重PCR(Overlap PCR)定点诱变扩增突变基因,重组入克隆载体PMD18-T-Vector,EcoRⅠ单酶切野生型和突变型CD59基因,重组入真核表达质粒pIRES,利用阳离子脂质体(Lipfectamine2000) 将重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO) 进行表达.结果:通过PCR定点诱变成功获得目的CD59突变基因MCD59,酶切鉴定及序列测定证实成功构建了pIRES-MCD59,转染CHO细胞,G418筛选出了稳定细胞克隆,检测筛选MCD59蛋白高表达株.免疫组化、免疫荧光、SDS-PAGE、ELISA验证CD59的表达;荧光染料释放试验研究显示与野生型CD59相比,突变型CD59失去对补体的抑制功能.结论:CD59的W40位点对其功能具有重要作用,封闭此位点可提高补体活性,有望用于肿瘤治疗.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张丽	青岛大学医学院免疫学教研室	67	272	8.0	14.0
2	王静	青岛大学医学院免疫学教研室	203	602	11.0	17.0
3	张艳丽	青岛大学医学院免疫学教研室	40	161	6.0	11.0
4	高美华	青岛大学医学院免疫学教研室	181	728	12.0	19.0
5	朱新红	青岛大学医学院免疫学教研室	13	43	4.0	5.0
6	任书荣	青岛大学医学院免疫学教研室	28	87	4.0	8.0
7	王秋波	青岛大学医学院免疫学教研室	39	127	5.0	9.0