CD59活性位点相关性基因突变的构建与表达

• 作者: 任书荣 朱新红 林存智 王秋波 高美华
• 来源期刊: 高技术通讯
• 学科: 工学
• 关键词: CD59 基因突变 真核表达 重叠延伸PCR 补体
• 年，卷（期）: 2008,（6）
• 所属期刊栏目: 资源环境与生物技术
• 页码范围: 645-649
• 页数: 5页
• 分类号: TP3
• 字数: 4219字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3772/j.issn.1002-0470.2008.06.017

摘要

构建了野生型和突变型CD59重组质粒,建立了高效真核表达系统,探讨了W40位点的生物学活性.采用基因点突变技术使CD59 W40基因位置缺失(突变1,M1)及C39W40K41→W39W40W41(突变2,M2),重叠延伸PCR(overlap extension PCR)定点诱变扩增突变基因,重组入真核表达质粒pIRES,利用阳离子脂质体(Lipfectamine2000) 将重组质粒转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)进行表达.酶切鉴定及序列测定证实成功构建了pIRES-M1CD59、pIRES-M2CD59和pIRES-WTCD59,突变基因约500bp.G418筛选出了CHO转染细胞的稳定细胞克隆,免疫荧光、ELISA检测筛选M1CD59、M2CD59和WTCD59蛋白高表达株,连续传代30代有高表达;补体溶细胞反应显示与野生型CD59相比,突变型M1CD59失去对补体的抑制功能,而M2CD59抗补体活性略增高.证实CD59的W40位点对其功能具有重要作用,封闭此位点可提高补体活性,有望用于肿瘤治疗.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高美华	青岛大学医学院免疫学教研室	181	728	12.0	19.0
2	林存智	青岛市胸科医院免疫研究室	28	108	6.0	8.0
3	朱新红	青岛大学医学院免疫学教研室	13	43	4.0	5.0
4	任书荣	青岛大学医学院免疫学教研室	28	87	4.0	8.0
5	王秋波	青岛大学医学院免疫学教研室	39	127	5.0	9.0