突变人CD59基因真核表达系统的构建

• 作者: 任书荣 张丽 张艳丽 王秋波 王静 高美华
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CD59 基因突变 真核表达
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 359-363
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3392字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建2种突变人CD59(HM CD59)重组质粒,建立高效真核表达系统.方法:采用基因点突变技术在CD59易于糖基化的位点K41-H44将H44基因位置变更或增加K的数目,构建2种不同的CD59突变基因,各设计两条互补突变引物和两条常规引物,以已构建CD59 cDNA为模板,3重PCR定点诱变扩增突变基因,EcoRⅠ酶切重组入真核表达质粒载体pALTER-MAX,利用阳离子脂质体(Lipfectamine-2000)将重组质粒和pcDNA3共转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary,CHO)进行表达.结果:通过PCR定点诱变成功获得目的CD59突变基因,序列测定及酶切鉴定均证实成功构建了pALTER-MAX-突变CD59重组真核表达载体系统,突变基因长度约500 bp.阳离子脂质体(Lipfectamine-2000)将重组载体质粒和pcDNA3共转染导入真核受体细胞(CHO),G418筛选出了稳定细胞克隆.结论:以突变CD59基因和pALTER-MAX质粒为基础构建的真核表达载体构建成功,脂质体转染法将重组质粒导入真核细胞并获得膜表面突变CD59分子的高效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张丽	青岛大学医学院免疫学教研室	67	272	8.0	14.0
2	王静	青岛大学医学院免疫学教研室	203	602	11.0	17.0
3	张艳丽	青岛大学医学院免疫学教研室	40	161	6.0	11.0
4	高美华	青岛大学医学院免疫学教研室	181	728	12.0	19.0
5	任书荣	青岛大学医学院免疫学教研室	28	87	4.0	8.0
6	王秋波	青岛大学医学院免疫学教研室	39	127	5.0	9.0