人突变CD59基因在CHO细胞的表达、检测及生物活性研究

• 作者: 吴宁 高美华
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CD59突变 真核表达系统 CHO细胞 细胞转染 抗补体活性
• 年，卷（期）: 2007,（5）
• 所属期刊栏目: 临床免疫学
• 页码范围: 456-459
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 3226字
• 语种: 中文

摘要

目的:分别构建两个高效表达人突变CD59的CHO细胞真核表达系统,探讨突变CD59基因表达蛋白糖基化前后抗补体活性的变化,为在基因水平阐明糖尿病血管增殖症的发病机理奠定基础.方法:将两种含不同突变基因的人CD59全长cDNA序列(HM7、HM8)的重组pALTER质粒运用阳离子脂质体导入法共转染CHO细胞,用含有400 μg/ml新霉素类似物(G418)的F12培养基筛选出阳性表达克隆,应用荧光免疫组化(FIH)检测CD59在CHO细胞表面的表达.经染料释放试验检测突变CD59糖基化前后抗补体活性.结果:运用阳离子脂质体导入法将重组pALTER质粒与pcDNA3质粒共转染CHO,成功筛选出的阳性克隆经FIH证明突变CD59可在CHO细胞表达.染料释放法证实两种突变CD59均具有抗补体活性,且在高糖环境下易糖基化,糖基化后抗补体活性明显降低.结论:建立了两个高效表达突变CD59的真核表达系统,获得阳性克隆细胞株.初步研究证实突变CD59具有抗补体活性,糖基化后抗补体活性明显降低,为单克隆抗体的制备奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴宁		3	37	2.0	3.0
2	高美华	青岛大学医学院免疫教研室	181	728	12.0	19.0