一种高效同时提取微量组织中总RNA、DNA和蛋白的技术方法的改进

• 作者: 汪军 王娟 胡志前 金凯舟 陈正军
• 来源期刊: 肝胆胰外科杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 改良Trizol法 基因组DNA 总RNA 总蛋白 提取
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 308-313
• 分类号: Q78
• 字数: 5310字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-1954.2012.04.013

摘要

目的 改进传统Trizol法,以至能从微量组织样品中提取高质量RNA并同时提取基因组DNA和总蛋白.方法 用改良后的Trizol法提取小鼠肝脏组织总RNA、基因组DNA以及总蛋白,并与传统Trizol法提取总RNA、商业化试剂盒提取基因组DNA和RIPA裂解Buffer提取总蛋白的方法进行比较.结果 改良Trizol法提取小鼠肝组织RNA的得率为3.64μg/mg,传统Trizol法为1.95μg/mg,平均D260/280比值为2.1和2.01;改良Trizol法能够得到比传统Trizol法更完整的RNA,琼脂糖电泳图谱中28S/18S的比值更接近2∶1.改良Trizol法与商业试剂盒相比,提取所得的基因组DNA尽管在得率上有较明显差距,分别为0.49μg/mg和1.78μg/mg,但仍保持较好的纯度.改良Trizol法提取所得蛋白的平均得率为RIPA Buffer裂解法的50％～60％,经过SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色法验证,并无明显蛋白丢失.结论 改良Trizol法可以同时提取组织的总DNA、RNA与总蛋白,相比传统Trizol法提取总RNA更高效、质量更优;相比商业化试剂盒提取基因组DNA更快捷、更经济;相比RIPA Buffer裂解法提取总蛋白在小分子蛋白的保留中更好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡志前	第二军医大学附属长征医院普外科	112	615	13.0	19.0
2	陈正军	中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所	4	26	3.0	4.0
3	汪军	第二军医大学附属长征医院普外科	7	32	4.0	5.0
4	金凯舟	第二军医大学附属长征医院普外科	3	10	1.0	3.0
5	王娟	第二军医大学附属长征医院普外科	5	23	3.0	4.0