蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素特异性多克隆抗体的制备及免疫电镜定位研究

• 作者: 余源 刘青 李冀 杨文思 沈海娥 王沂 王洋 田喜凤
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: α-4贾第素 蓝氏贾第鞭毛虫 免疫胶体金电镜 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 916-919
• 页数: 4页
• 分类号: R382.21
• 语种: 中文

摘要

目的 制备针对蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素的特异性抗体,免疫胶体金电镜观察该贾第素的亚细胞定位.方法 生物信息学分析并合成α-4贾第素抗原肽,与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联后免疫新西兰白兔,Protein A亲和层析纯化抗血清,采用α-4贾第素重组蛋白和贾第虫滋养体全虫体裂解物通过Western blot验证抗血清结合力和结合特异性,选择高特异性抗体通过免疫胶体金电镜观察α-4贾第素的亚细胞定位. 结果 筛选出3段可能的抗原肽,合成的抗原肽与KLH偶联后免疫兔得到高效价抗血清,Protein A纯化效果良好;3种纯化抗血清均能与α-4贾第素结合,其中anti-P2具有较高的抗原结合特异性.采用anti-P2进行免疫胶体金电镜,显示α-4贾第素主要定位于鞭毛,胞浆也有少量散在表达. 结论 制备的α-4贾第素多克隆抗体具有抗原结合特异性.用anti-P2进行免疫胶体金电镜,α-4贾第素主要定位于贾第虫鞭毛.