蓝氏贾第鞭毛虫α-7.1、α-11贾第素的原核表达及抗原活性鉴定

• 作者: 余源 慈雅丽 曹蕾 杨志宏 王卫亮 王沂 王洋 田喜凤 陈阳
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 蓝氏贾第鞭毛虫 α-7.1贾第素 α-11贾第素 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 474-478
• 分类号: R382
• 字数: 4635字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2012.05.017

摘要

目的 原核表达蓝氏贾第鞭毛虫的α-7.1、α-11贾第素蛋白.方法 经RT-PCR获得α-7.1、α-11贾第素基因片段,经双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),构建成为重组表达载体pET-28a(+)-α-7.1及pET-28a(+)-α-11,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3).IPTG诱导后,收集菌体,裂解后进行SDS-PAGE及Western blot检测.结果 成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-α-7.1和 pET-28a(+)-α-11,经IPTG诱导后,在大肠杆菌中高效表达,SDS-PAGE及Western blot分析显示,在相对分子量约43kD和35kD的位置分别出现目的 蛋白条带,与理论值相符;通过相应α-7.1、α-11贾第素抗血清的Western blot证实两种贾第素重组蛋白的抗原活性良好;经Ni-NTA亲和层析柱纯化获得了高纯度的重组的α-7.1、α-11贾第素融合蛋白.结论 成功地克隆、表达并纯化了具有良好抗原活性的α-7.1、α-11贾第素蛋白.