蓝氏贾第鞭毛虫胞外核酸酶的表达纯化和活性鉴定

• 作者: 余源 刘晓莉 周英斌 李冀 李少东 王沂 王洋 田喜凤 赵俊暕
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 蓝氏贾第鞭毛虫 胞外核酸酶 生物信息学 原核表达 活性鉴定
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 65-69,82
• 页数: 6页
• 分类号: R382.21
• 字数: 4548字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2016.01.014

摘要

目的 克隆、原核表达蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,贾第虫)的胞外核酸酶编码区,并对其蛋白产物进行活性鉴定.方法 对贾第虫胞外核酸酶(GeNuc)蛋白进行生物信息学分析,根据分析结果以C2株贾第虫基因组DNA为模板扩增获得GeNuc去信号肽段编码区序列,双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),将酶切和测序验证正确的重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE及Western blot鉴定蛋白产物.Ni-NTA亲和层析纯化GeNuc蛋白,经复性后验证其对质粒DNA的水解能力.结果 成功克隆了长约800 bp的GeNuc编码区并构建了原核表达载体pET-28a(+)-GeNuc,测序结果显示C2株GeNuc序列与WB株相同;在大肠杆菌中诱导表达获得了相对分子量约30.8 kDa的融合蛋白;复性后的纯化GeNuc蛋白具有降解双链DNA的能力,但活性较商品化DNase Ⅰ低.结论 证明了GeNuc的存在,为GeNuc抗体的制备及贾第虫致病机制的研究提供了实验材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王洋		24	56	4.0	7.0
2	田喜凤	华北理工大学生命科学学院	8	3	1.0	1.0
3	余源	华北理工大学生命科学学院	5	3	1.0	1.0
4	赵俊暕	华北理工大学附属医院检验科	12	32	3.0	5.0
5	王沂	华北理工大学附属医院检验科	2	3	1.0	1.0
6	李冀	华北理工大学生命科学学院	3	3	1.0	1.0
7	刘晓莉	华北理工大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
8	周英斌	华北理工大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
9	李少东	华北理工大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0