Ipr1/ PPE68穿梭质粒构建及诱导BALB/c小鼠免疫应答的探讨

• 作者: 何永林 张壮苗 徐蕾 李岱容 杨春 王静娴 董志玲 靳志栋
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: MTB Ipr1 PPE68 DNA疫苗 免疫应答
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 429-432
• 分类号: R378
• 字数: 3498字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2012.05.005

摘要

目的 构建Ipr1/ PPE68共表达穿梭质粒pBIPO (pBud-Ipr1-PPE68-OriM),探讨其诱导BALB/C小鼠的免疫应答特征.方法 将Ipr1基因和PPE68编码序列以及结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的复制子OriM分别插入质粒pBudCE4.1的多克隆位点,构建共表达穿梭质粒pBIPO,经酶切测序及Western blotting鉴定后,用其免疫BALB/c小鼠,于末次免疫后2w处死小鼠,ELISA法分别检测小鼠血清中lgG2a、IL-12及IFN-γ的水平,流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞数量,MTT法检测特异性脾淋巴细胞增殖,同时观察肺脾组织病理学变化.结果 酶切测序鉴定PPE68和Ipr1基因序列与理论值相符,Western-blotting鉴定PPE68和Ipr1蛋白表达成功.质粒pBIPO免疫后小鼠血清中的lgG2a、IFN-γ及IL-12水平与CD4+和CD8+T细胞表达均呈现出有意义的提高,脾淋巴细胞增殖与BCG组相比差异无统计学意义,肺脾组织未见病理学改变.结论 成功构建DNA疫苗(pBIPO),该疫苗能够有效诱导BALB/c小鼠的细胞免疫应答,为进一步研究其抗MTB的免疫保护作用奠定基础.